細胞培養質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到實(shí)驗進(jìn)行得順利與否。無(wú)數童鞋都經(jīng)歷過(guò)因為細胞污染而影響實(shí)驗進(jìn)度的問(wèn)題，被老板批評是小事，要是影響到按時(shí)畢業(yè)可就粗大事了。
作者：解螺旋.毛博
來(lái)源：解螺旋，醫生科研助手
下面，毛博討論一下細胞培養常見(jiàn)污染的識別及處理。
1、**：
識別：**在顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染**的不同，可有不同的外形，有球形，鏈形，桿形等。大家不必深究。只要發(fā)現培養液渾濁變黃，培養瓶頂部有一層細沙一樣的東西。就知道大事不好啦。見(jiàn)下圖。
處理：可在培養液中加相應的***處理?？梢杂盟沫h(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/ml；鏈霉素的工作濃度是100 μg/ml。其實(shí)，毛毛蟲(chóng)說(shuō)句實(shí)話(huà)，一旦發(fā)生污染，就已經(jīng)大勢已去了。如果細胞不是特別特別珍貴的話(huà)，還是趁早扔了，重起爐灶吧。
所以，*重要的還是防范于未然。做好培養間，CO2孵箱，器皿和培養液的****工作。在操作的時(shí)候，嚴格執行無(wú)菌操作規范。
2、霉菌：
識別：因為培養液是清亮的，所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現，等發(fā)現時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過(guò)晚了。培養液中慢慢地出現絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細絲狀的團狀漂浮物，如同風(fēng)中柳絮。細胞仍可生長(cháng)，但時(shí)間一長(cháng)，細胞的狀態(tài)就變差。見(jiàn)下圖。
處理：細胞一旦被霉菌污染，很難挽救，兩性霉素B或制霉菌素都于事無(wú)補，建議果斷舍棄該污染細胞，將環(huán)境徹底**。
采用酒精徹底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍。把水盤(pán)里加上飽和量的硫酸銅。
3、支原體：
識別：多為多邊形，培養液一般會(huì )變渾濁。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是和你一起慢慢變老。支原體污染后，可影響所有的細胞生長(cháng)參數。故進(jìn)行實(shí)驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實(shí)驗結果之數據方有意義。
處理：沒(méi)有什么好處理的。直接扔了吧。污染到其他的細胞就虧大發(fā)了。還是那句話(huà)，預防為主。
4、黑蛟蟲(chóng)：
識別：誰(shuí)都不知道所謂的“黑膠蟲(chóng)”是什么東西。據說(shuō)是納米級的**。低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去。培養液也是不渾的，一般不會(huì )太影響。但是如果太多了，也會(huì )影響細胞生長(cháng)和實(shí)驗結果。
處理：因為根本不知道這是什么物種，所以也談不上什么處理方式。建議如果細胞有可能是此種污染的話(huà)，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5、**：
識別：**污染和霉菌污染差不多。一般培養液清亮，所以很難早期發(fā)現。鏡下有時(shí)候象絲狀，有時(shí)候象珊瑚狀。慢慢地會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。這個(gè)時(shí)候，已經(jīng)晚了，細胞很難救活了。
處理：同霉菌污染一樣，沒(méi)有什么好處理的，直接扔了吧。然后徹底****培養間，CO2孵箱，器皿和培養液。亡羊補牢吧。
綜上所述，兩個(gè)原則：預防為主，果斷扔掉。如果細胞實(shí)在特別特別特別珍貴。那就只好死馬當活馬醫了。用廣譜***5倍推薦濃度沖擊一下。當然細胞狀態(tài)差的話(huà)不一定熬得住。同時(shí)增加傳代時(shí)的細胞的密度，培養基中的血清濃度，勤換液。也可以不加***進(jìn)行單克隆有限稀釋至96孔板，再克隆化。