目前，常用的****方法多采用物理方法(如干熱**法、濕熱**法、過(guò)濾**法、射線(xiàn)**法等)和化學(xué)方法(**劑、***)兩大類(lèi)。
1.干熱**法
是利用恒溫干燥箱內160℃～170℃的高熱，并保持90～120分鐘，殺死**和芽孢，達到**目的的一種方法。主要適用于不便在壓力蒸汽**器中進(jìn)行**，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的**。用此方法**的物品干燥，易于貯存。酒精燈火焰燒灼**法也是屬于干熱**的方法之一，在進(jìn)行微生物檢測工作時(shí)，常須利用工作臺面上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進(jìn)行補充**。
2.濕熱**法
壓力蒸汽濕熱**法是目前*常用的一種**方法。它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環(huán)境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而使微生物死亡。適合于布類(lèi)工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和培養基的**。高壓蒸汽**器的蒸汽壓力一般調整為0.10-0.11MPa，維持20～30min即可達到**效果。
3.射線(xiàn)**法
利用紫外線(xiàn)燈進(jìn)行照射**的方法。紫外線(xiàn)是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線(xiàn)的作用機制是通過(guò)對微生物的核酸及蛋白質(zhì)等的破壞作用而使其滅活。適合于實(shí)驗室空氣、地面、操作臺面**。**時(shí)間為30min。用紫外線(xiàn)**時(shí)應注意，不能邊照射邊進(jìn)行實(shí)驗操作，因為紫外線(xiàn)不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養物及一些試劑等也會(huì )產(chǎn)生**影響。
4.過(guò)濾**法
是將液體或氣體通過(guò)有微孔的濾膜過(guò)濾，使大于濾膜孔徑的**等微生物顆粒阻留，從而達到**的方法。過(guò)濾**法大多用于遇熱易發(fā)生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養基等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過(guò)濾**，或用玻璃**濾器、濾球負壓過(guò)濾**。濾膜孔徑應在0.22～0.45μm范圍內或用更小的**濾膜，溶液通過(guò)濾膜后，**和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻，并利用濾膜的吸附作用，阻制小于濾膜孔徑的**透過(guò)。
5.化學(xué)**劑**法
用于那些不能利用物理方法進(jìn)行**的物品、空氣、工作面、操作者皮膚、某些實(shí)驗器皿等。常用的化學(xué)**劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%～75%乙醇、過(guò)氧乙酸、來(lái)蘇爾水、0.1%新潔爾滅、環(huán)氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進(jìn)行實(shí)驗材料的**；利用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏蒸法進(jìn)行無(wú)菌室和培養室的**。在使用時(shí)應注意**，特別是用在皮膚或實(shí)驗材料上的**劑，須選用合適的藥劑種類(lèi)、濃度和處理時(shí)間，才能達到**和**的目的。
6.***抑菌法
主要用于培養基，是培養過(guò)程中預防微生物污染的重要手段以及作為微生物污染不嚴重時(shí)的“急救”措施。常用的***有青霉素、鏈霉素和新霉素等。
1.無(wú)菌操作室**
由于無(wú)菌操作室的污染來(lái)源主要是空氣中的**和**孢子，因此長(cháng)期停用后的無(wú)菌操作室應進(jìn)行熏蒸**，熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進(jìn)行無(wú)菌室的**。經(jīng)常使用的無(wú)菌操作室，在每次使用前都應進(jìn)行地面衛生清潔，并用紫外線(xiàn)燈照射30min，進(jìn)行空氣**。對超凈工作臺，每次操作前用紫外燈照射30min，然后用70%～75%酒精擦拭。
2.培養液**
培養液在制備過(guò)程中帶有各種雜菌，分裝后應立即**，至少也應在4小時(shí)內完成**工序。目前常用過(guò)濾**法除去培養物操作液和培養液中的**?；驅ε囵B液中耐熱組分先進(jìn)行高壓蒸汽**，然后在無(wú)菌室加入經(jīng)過(guò)過(guò)濾**的不耐熱溶液，混勻后分裝備用。
使用高壓蒸汽**器**時(shí)，將分裝好的培養液放入底部有一定量(淹沒(méi)加熱管)涼水的高壓蒸汽**器內，增壓至0.035~0.040 MPa時(shí)排凈**器內冷空氣，以便使蒸汽能到達各個(gè)**部位，保證****徹底。然后繼續加壓加熱，當壓力表讀數達到0.10~0.11MPa為121℃，保持15~20min即可。由于****效果取決于溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長(cháng)的****時(shí)間是必須的。
在121℃的蒸汽溫度下可以很快殺死各種**及高度耐熱的芽孢桿菌，因此許多培養液的****壓力、溫度一般保持在0.10~0.11MPa、121℃。****時(shí)間與需要****的培養液量密切相關(guān)(表1)，時(shí)間不足達不到**效果，時(shí)間過(guò)長(cháng)培養液內的一些化學(xué)物質(zhì)遭到破壞，影響培養液成分。****結束后，關(guān)閉熱源，只有當**器內壓力降為零時(shí)才能打開(kāi)放氣閥，排除剩余蒸汽，取出培養液。不可在壓力較高時(shí)打開(kāi)放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養液組成中如含有遇熱易分解的物質(zhì)，則需用過(guò)濾方法****。首先對培養液中耐熱組分進(jìn)行高壓蒸汽**后放置在無(wú)菌場(chǎng)所，固體培養液在40℃左右瓊脂即將凝結前，加入經(jīng)過(guò)過(guò)濾**的不耐熱溶液，混勻后冷卻備用。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器械**
玻璃器皿可進(jìn)行干熱**或高壓蒸汽**，但在蒸汽**后*好及時(shí)烘干水分。對不能進(jìn)行高壓蒸汽**的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在無(wú)菌操作臺面上晾干的同時(shí)，用紫外線(xiàn)重復**。實(shí)驗室還可以用環(huán)氧乙烷**袋對塑料器皿進(jìn)行**，**后的器皿要充分散氣2～4小時(shí)后才可使用。無(wú)菌操作所用的各種器械，一般采用干熱或高壓蒸汽**，或用75%酒精浸泡，然后在無(wú)菌操作臺面上晾干的同時(shí)再用紫外線(xiàn)重復**；在使用期間可多次對其進(jìn)行酒精燈火焰灼燒**。
4.培養材料的****
采自動(dòng)物機體的實(shí)驗材料，攜帶著(zhù)微生物及雜質(zhì)，接種前須進(jìn)行表面****，對內部已受微生物侵染的材料應予以淘汰。從動(dòng)物機體采集的某些組織塊，須用**劑進(jìn)行浸泡處理，進(jìn)行表面**。常用**劑有過(guò)氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過(guò)氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
撰寫(xiě)驗證方案及制定評估標準。
確認**設備技術(shù)資料齊全、安裝正確，并能處于正常運行。
確認關(guān)鍵設備控制儀表在規定的參數范圍內能正常運行。
采用被**物品或模擬物品進(jìn)行重復實(shí)驗確認**效果符合規定。
完善文件記錄，撰寫(xiě)驗證報告。
關(guān)鍵參數應在驗證確定的范圍內：溫度、壓力、時(shí)間、濕度、**氣體濃度、輻照劑量等。
**程序定期驗證，時(shí)效不超過(guò)半年。
**設備或程序發(fā)生變更重新進(jìn)行驗證。
**效果與**前產(chǎn)品污染程度及污染菌特性有關(guān)，把握微生物污染水平及污染菌耐受性，注意各個(gè)環(huán)節降低污染程度。
**冷卻階段防止已**物品再次污染。
適用生物指示劑、化學(xué)指示劑等監控**結果。
基本要求：
菌種的耐受性應大于需**產(chǎn)品中所有可能污染菌的耐受性。
菌種應無(wú)致病性。
菌株應穩定，存活期長(cháng)，易于保存。
易于培養。若使用休眠孢子，孢子含量在90%以上。
濕熱**：嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105～5×106個(gè)/片)。
干熱**：枯草芽孢桿菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105～5×106個(gè)/片)。
輻射**：短小芽孢桿菌孢子（ATCC27142等，活孢子數為5×107～5×108個(gè)/片)。
高壓蒸汽**法：用高溫加高壓**，不僅可殺死一般的**，對**芽胞也有殺滅效果，是*可靠、應用*普遍的物理**法。主要用于能耐高溫的物品，如金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些**和部分培養基的**。